Helios Plasmide Double Nickase (h2): sc-402984-NIC-2

L’IKZF2 umano codifica Helios, un fattore di trascrizione a dita di zinco della famiglia di Ikaros che si lega al DNA per regolare programmi di espressione genica che governano l’impegno di linea dei linfociti, la maturazione dei timociti e la specializzazione funzionale delle cellule T. Helios partecipa a reti trascrizionali associate alla cromatina che modellano l’attivazione guidata dal TCR, le risposte alla segnalazione delle citochine e il controllo epigenetico della tolleranza immunitaria, con ruoli di primo piano nella stabilità delle cellule T regolatorie e nell’omeostasi immunitaria. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di IKZF2/Helios sono state associate a contesti di disregolazione immunitaria e di neoplasie ematologiche, inclusi cambiamenti negli stati di differenziazione delle cellule T e profili trascrizionali leucemici. Gli strumenti di ricerca su IKZF2 supportano studi meccanicistici sull’occupazione del fattore di trascrizione, sui circuiti di regolazione genica e sulle transizioni di stato cellulare in modelli di immunologia umana, utilizzando perturbazioni basate su CRISPR, saggi reporter e profilazione multi-omica.

Helios Il plasmide Double Nickase (h2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IKZF2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IKZF2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IKZF2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IKZF2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.