Plásmido Doble Nickase (h2) Helios: sc-402984-NIC-2

El IKZF2 humano codifica Helios, un factor de transcripción con dedos de zinc de la familia Ikaros que se une al ADN para regular programas de expresión génica que gobiernan el compromiso de linaje de los linfocitos, la maduración de los timocitos y la especialización funcional de las células T. Helios participa en redes transcripcionales asociadas a la cromatina que moldean la activación impulsada por el TCR, las respuestas a la señalización de citocinas y el control epigenético de la tolerancia inmunitaria, con funciones destacadas en la estabilidad de las células T reguladoras y la homeostasis inmunitaria. La expresión o actividad alteradas de IKZF2/Helios se han asociado con la desregulación inmunitaria y con contextos de neoplasias hematológicas, incluidas modificaciones en estados de diferenciación de las células T y perfiles transcripcionales leucémicos. Las herramientas de investigación de IKZF2 respaldan estudios mecanísticos de la ocupación del factor de transcripción, los circuitos reguladores de genes y las transiciones de estado celular en modelos de inmunología humana mediante perturbación basada en CRISPR, ensayos con reporteros y perfiles multiómicos.

Helios El plásmido de doble nicasa (h2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IKZF2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IKZF2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IKZF2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IKZF2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.