HDGF Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-402859-LAC-2

L’HDGF umano (hepatoma-derived growth factor) codifica una proteina nucleare e secreta in grado di legare l’eparina, che può agire come fattore mitogeno e pro-sopravvivenza, con ruoli nella progressione del ciclo cellulare, nella regolazione trascrizionale e in processi associati alla cromatina. L’HDGF è collegato a reti di segnalazione che sostengono proliferazione, migrazione e programmi angiogenici, e contribuisce alle risposte allo stress e al rimodellamento tissutale attraverso un’attività autocrina/paracrina dipendente dal contesto. Un’espressione deregolata di HDGF è stata riportata in molteplici tumori e in patologie fibrotiche e vascolari, dove è frequentemente associata a fenotipi cellulari aggressivi e a interazioni alterate con il microambiente tumorale. La perturbazione genetica di HDGF supporta studi meccanicistici sulla biologia dei fattori di crescita, sui motivi di traslocazione nucleare (ad esempio il legame alla cromatina mediato dal dominio PWWP) e sulla mappatura delle vie a valle in modelli di oncogenesi, infiammazione e fibrosi.

Le particelle di attivazione lentivirale HDGF (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HDGF in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HDGF (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HDGF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HDGF. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HDGF e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.