Hbb-y Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420805

Panoramica

Hbb-y codifica una subunità beta-simile dell’emoglobina murina che contribuisce all’assemblaggio del tetramero di emoglobina e al trasporto di ossigeno negli eritrociti. Nell’ambito del programma di differenziazione eritroide, l’espressione di Hbb-y è coordinata con la biosintesi dell’eme, l’equilibrio tra le catene globiniche e le vie di maturazione dei globuli rossi, regolate da reti trascrizionali eritroidi. Alterazioni nei geni beta-globin–like possono compromettere la stabilità dell’emoglobina e la fisiologia dei globuli rossi, offrendo modelli per studiare meccanismi rilevanti per anemia, emoglobinopatie ed eritropoiesi da stress. Nel topo, Hbb-y è utile anche per analizzare la regolazione dello sviluppo e le differenze specifiche di ceppo all’interno del cluster genico della beta-globina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Hbb-y (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hbb-y in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hbb-y insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hbb-y a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Hbb-y.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hbb-y per lo studio della segnalazione di Hbb-y, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hbb-y critici per la funzione di Hbb-y
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hbb-y per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Hbb-y CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Hbb-y CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hbb-y. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Hbb-y Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Hbb-y (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hbb-y per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hbb-y definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.