HARE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405069

Panoramica

STAB2 codifica il recettore dell’ialuronano per l’endocitosi (HARE), un recettore “scavenger” multifunzionale espresso prevalentemente nelle cellule endoteliali sinusoidali del fegato e in specifiche popolazioni della linea macrofagica. HARE media l’assorbimento dipendente dalla clatrina e la clearance lisosomiale dell’ialuronano e di diversi ligandi anionici, collegando il turnover della matrice extracellulare all’endocitosi mediata da recettore e all’omeostasi vascolare. Attraverso la regolazione del catabolismo dell’ialuronano e del traffico dei glicosaminoglicani circolanti, STAB2 influenza la segnalazione infiammatoria, la dinamica di adesione dei leucociti e i programmi di rimodellamento tissutale. Alterazioni dell’attività di STAB2 sono state associate a una gestione disfunzionale dell’ialuronano in contesti di fibrosi e malattie infiammatorie, supportandone l’utilizzo come nodo meccanicistico negli studi di biologia della matrice e delle vie di clearance.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HARE (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene STAB2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del STAB2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto STAB2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HARE.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di STAB2 per lo studio della segnalazione di HARE, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni STAB2 critici per la funzione di HARE
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di STAB2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HARE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HARE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus STAB2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HARE Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HARE (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia STAB2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio STAB2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.