HADHA Double Nickase Plasmid (h): sc-402803-NIC

HADHA kodiert die Alpha-Untereinheit des mitochondrialen trifunktionalen Proteins, eine zentrale Komponente der Fettsäure-β-Oxidation, die die für den Stoffwechsel langkettiger Fettsäure-Acyl-CoAs erforderlichen Schritte der Enoyl-CoA-Hydratase und der 3‑Hydroxyacyl‑CoA‑Dehydrogenase katalysiert. Durch die Kopplung mit HADHB unterstützt HADHA die Energiehomöostase während des Fastens und bei hohem oxidativem Bedarf und verknüpft den Lipidabbau mit der mitochondrialen Funktion und dem Redoxgleichgewicht. Störungen von HADHA sind mit mitochondrialen Fettsäureoxidationsstörungen assoziiert, darunter der Mangel an langkettiger 3‑Hydroxyacyl‑CoA‑Dehydrogenase und der Mangel des mitochondrialen trifunktionalen Proteins, die sich unter anderem mit Kardiomyopathie, hypoketotischer Hypoglykämie und Myopathie manifestieren können. HADHA wird daher breit in Zusammenhang mit metabolischen Stressantworten, mitochondrialer Proteostase und lipidvermittelter Signalgebung untersucht, die für die neuromuskuläre und kardiale Biologie relevant sind.

HADHA Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HADHA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HADHA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HADHA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HADHA-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.