G_{γ 5} Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407524

Panoramica

GNG5 codifica la subunità umana Gγ5, un componente fondamentale delle proteine G eterotrimeriche che collegano i recettori accoppiati a proteine G (GPCR) attivati alla segnalazione a valle. Associandosi alle subunità Gβ, i dimeri Gβγ regolano enzimi effettori e canali ionici, modulando vie dei secondi messaggeri come ad esempio l’adenilato ciclasi/cAMP, la fosfolipasi Cβ/IP3–DAG e la segnalazione PI3K–AKT. La segnalazione dipendente da Gγ5 influenza processi quali migrazione cellulare, eccitabilità di membrana e rimodellamento del citoscheletro; inoltre, un’alterata attività delle vie GPCR/proteine G è spesso implicata nella biologia del cancro, nell’infiammazione e in disfunzioni cardiovascolari e neurologiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Gγ 5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GNG5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GNG5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GNG5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Gγ 5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GNG5 per lo studio della segnalazione di Gγ 5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GNG5 critici per la funzione di Gγ 5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GNG5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Gγ 5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Gγ 5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GNG5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Gγ 5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Gγ 5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GNG5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GNG5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.