G_{β 4} Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400820-ACT

GNB4 codifica a subunidade beta Gβ4 da proteína G heterotrimérica humana, um arcabouço central que estabiliza as subunidades Gα e Gγ e propaga sinais a jusante de GPCRs ativados. Ao coordenar o engajamento de efetores, a Gβ4 ajuda a modular vias de segundos mensageiros como cAMP/PKA e a sinalização PLCβ–IP3/DAG–Ca²⁺, influenciando cascatas de quinases, incluindo MAPK/ERK. Esses processos regulam desfechos dependentes do contexto em proliferação, diferenciação, secreção e excitabilidade neuronal. Alterações na dinâmica de sinalização GPCR–proteína G envolvendo GNB4 têm sido estudadas em relação a fenótipos neurológicos e a uma desregulação mais ampla de sinalização relevante para estados celulares associados a doenças.

Gβ 4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GNB4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gβ 4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GNB4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GNB4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gβ 4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GNB4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gβ 4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gβ 4 em células tumorais com expressão de GNB4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.