G_{β 1} Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-420606-LAC-2

O gene Gnb1 de camundongo codifica a subunidade Gβ1 de proteínas G heterotriméricas, um componente central da sinalização por GPCR que forma dímeros obrigatórios com subunidades Gγ para regular a atividade de Gα e propagar sinais a efetores como as adenilil ciclases, a fosfolipase Cβ e canais iônicos; por meio dessas interações, a Gβ1 ajuda a coordenar a dinâmica de segundos mensageiros, a excitabilidade de membrana e cascatas de quinases, incluindo MAPK/ERK, moldando respostas celulares a neurotransmissores, hormônios e estímulos sensoriais; a sinalização dependente de Gβ1 alterada é relevante para estudos de disfunção do neurodesenvolvimento e da neurofisiologia, nos quais perturbações no equilíbrio das vias de GPCR podem afetar a transmissão sináptica e a atividade de redes neurais; a edição gênica ou a perturbação de Gnb1 em modelos murinos permite a dissecação mecanística do acoplamento GPCR-efetor, do viés de sinalização e do crosstalk entre vias usando ensaios como leituras de cAMP/PLC, eletrofisiologia e perfilamento fosfoproteômico.

As Partículas de Ativação Lentivirais Gβ 1 (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Gnb1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Gβ 1 (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Gnb1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Gβ 1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Gnb1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.