Plasmide CRISPR d'Activation (m) G_{β 1}: sc-420606-ACT

Le gène murin **Gnb1** code la sous-unité **Gβ1** des protéines G hétérotrimériques, partenaire indispensable de **Gγ**, qui relie les RCPG (récepteurs couplés aux protéines G) activés à leurs effecteurs en aval. Les complexes contenant Gβ1 régulent la propagation du signal vers des voies telles que l’adénylate cyclase/AMPc, la phospholipase Cβ/flux de Ca²⁺, la modulation des canaux ioniques et la signalisation MAPK, contribuant ainsi à façonner la neurotransmission, la signalisation sensorielle et les réponses hormonales. En contrôlant la dynamique des seconds messagers et les mécanismes de désensibilisation des récepteurs, Gβ1 influe sur des décisions d’état cellulaire, notamment l’excitabilité, la prolifération et la migration. Une signalisation RCPG–protéine G dérégulée et une activité altérée de GNB1 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurologiques, ainsi qu’à des déséquilibres plus larges de signalisation pertinents pour des processus oncogéniques et métaboliques dans des modèles expérimentaux.

Gβ 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gnb1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Gβ 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gnb1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gnb1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Gβ 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gnb1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Gβ 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Gβ 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Gnb1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.