Gα t2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401528-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Gα t2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Gα t2 Double Nickase Plasmid (h) e il Gα t2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GNAT2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Gα t2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401528-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Gα t2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401528-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNAT2 codifica la subunità umana Gαt2 (Gαt2), una subunità α di una proteina G eterotrimerica nota soprattutto per accoppiare le opsine attivate agli enzimi effettori a valle nella fototrasduzione. In seguito all’attivazione dei GPCR, Gαt2 promuove la segnalazione attraverso il metabolismo dei nucleotidi ciclici e la regolazione dei canali ionici correlati, consentendo rapidi cambiamenti dell’eccitabilità cellulare dipendenti dallo stimolo. Nell’ambito dell’architettura più ampia della segnalazione mediata da GPCR, GNAT2 contribuisce a integrare l’attivazione recettoriale con le vie dei secondi messaggeri e con il ciclo delle proteine G, mediato dal legame e dall’idrolisi del GTP. L’alterazione di componenti della segnalazione legati alla trasducina è stata implicata in disfunzioni del sistema visivo e fornisce un quadro per studiare i meccanismi di amplificazione e adattamento del segnale guidati dai GPCR.
Gα t2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GNAT2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GNAT2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GNAT2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GNAT2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.