Gα t2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401528
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Gα t2 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Gα t2 , resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Gα t2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401528 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
GNAT2 codifica a subunidade alfa da transducina (Gαt2), uma proteína G heterotrimérica que acopla opsinas ativadas a efetores a jusante na fototransdução. Após a estimulação de GPCR, a Gαt2 troca GDP por GTP, dissocia-se de Gβγ e modula a sinalização de nucleótidos cíclicos para moldar a excitabilidade celular e respostas dependentes de estímulo. Embora seja mais bem caracterizada em contextos de sinalização retiniana, a GNAT2 oferece um ponto de entrada acessível para estudar o acoplamento GPCR–proteína G, a regulação do ciclo de GTPase e os mecanismos de terminação do sinal que fazem interface com o metabolismo de cGMP e o controlo de canais iónicos. Alterações genéticas em GNAT2 têm sido associadas a fenótipos hereditários de disfunção visual, sustentando a sua relevância para modelar defeitos de sinalização sensorial e compensação de vias.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Gα t2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GNAT2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GNAT2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GNAT2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Gα t2 .
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GNAT2 para a investigação da sinalização de Gα t2 , estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GNAT2 críticos para a função Gα t2
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GNAT2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Gα t2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Gα t2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GNAT2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Gα t2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Gα t2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GNAT2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GNAT2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.