gremlin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401244-ACT

GREM1 codifica a gremlin-1, uma glicoproteína secretada que atua como antagonista extracelular de proteínas morfogenéticas ósseas (BMP2, BMP4 e BMP7), moldando a sinalização da superfamília BMP/TGF-β durante o desenvolvimento e na homeostase dos tecidos adultos. Ao modular a disponibilidade de ligantes, a gremlin-1 influencia decisões de destino celular, interações epitélio–mesênquima e programas de remodelação como proliferação, diferenciação e fibrose. A expressão desregulada de GREM1 tem sido associada a alterações no diálogo estroma–epitélio, deposição anômala de matriz e sinalização microambiental pró-tumorigênica em múltiplos contextos de doença, incluindo distúrbios fibróticos e vias associadas ao câncer. Essas características tornam GREM1 um alvo útil para estudos mecanísticos do controle da via BMP e de redes de sinalização extracelular.

gremlin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GREM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

gremlin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GREM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GREM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de gremlin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GREM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de gremlin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via gremlin-1 em células tumorais com expressão de GREM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.