GRB14 Plasmide Double Nickase (h): sc-405224-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GRB14 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GRB14 Double Nickase Plasmid (h) e il GRB14 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GRB14. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GRB14 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405224-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GRB14 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405224-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRB14 (growth factor receptor–bound protein 14) è una proteina adattatrice che si lega alle tirosin-chinasi recettoriali attivate, con ruoli di primo piano nella modulazione della segnalazione del recettore dell’insulina e di IGF1R. Interagendo con i siti di fosforilazione del recettore e con gli effettori a valle, GRB14 influenza l’output delle vie PI3K–AKT e MAPK, plasmando il metabolismo cellulare, la proliferazione e la regolazione tramite feedback. Un’alterata attività di GRB14 è stata associata a una segnalazione insulinica disregolata e a fenotipi metabolici, e il suo contesto di segnalazione è rilevante anche per stati cellulari guidati da fattori di crescita studiati nella biologia del cancro. In quanto regolatore di tipo “scaffold”, GRB14 rappresenta un nodo facilmente interrogabile per analizzare i meccanismi di fine regolazione delle vie di segnalazione e di attenuazione del segnale nelle cellule umane.
GRB14 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GRB14 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GRB14. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GRB14. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GRB14 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.