GPR4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403659

Panoramica

GPR4 codifica un recettore accoppiato a proteine G sensibile ai protoni che funge da sensore del pH cellulare, traducendo l’acidosi extracellulare in segnali intracellulari. Una volta attivato, GPR4 si accoppia a proteine G eterotrimeriche per modulare le vie dipendenti da cAMP/PKA e dalla fosfolipasi C, influenzando i flussi di calcio, la dinamica del citoscheletro e programmi trascrizionali legati al comportamento delle cellule endoteliali e immunitarie. La sua espressione è arricchita in contesti vascolari e infiammatori, in cui sono comuni microambienti acidi, ed è stato studiato in relazione all’attivazione endoteliale, al reclutamento dei leucociti e alle risposte tissutali all’ipossia e all’infiammazione. Un’alterazione della segnalazione di GPR4 è stata associata a una disregolazione dei segnali infiammatori e delle risposte allo stress del microambiente, rilevanti per la biologia delle malattie cardiovascolari e immuno-mediate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GPR4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GPR4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GPR4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GPR4 per lo studio della segnalazione di GPR4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GPR4 critici per la funzione di GPR4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GPR4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPR4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GPR4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPR4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GPR4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GPR4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.