Partículas Lentivirales de Activación (m) GPR35: sc-425672-LAC

El gen **Gpr35** de ratón codifica **GPR35**, un receptor acoplado a proteína G de tipo rodopsina implicado en la detección de ligandos de molécula pequeña y en la modulación de las salidas de señalización intracelular que influyen en el flujo de calcio, la dinámica del AMPc y los programas transcripcionales posteriores. La actividad de GPR35 se ha asociado con la regulación de la quimiotaxis y la activación de células inmunitarias, las respuestas de la barrera epitelial y redes de señalización inflamatoria más amplias, incluidas vías que convergen con la expresión génica dependiente de MAPK y NF-κB. Se han descrito patrones de expresión y asociaciones genéticas de GPR35 en tejidos relevantes para la inmunidad mucosa y la homeostasis metabólica, lo que motiva su investigación en modelos de inflamación intestinal, señalización del dolor y fenotipos cardiometabólicos. Como GPCR conservado con acoplamiento dependiente del contexto, GPR35 constituye un nodo manejable para diseccionar programas de regulación génica impulsados por receptores en células primarias y en sistemas murinos relevantes para enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral GPR35 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Gpr35 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral GPR35 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Gpr35, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de GPR35. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Gpr35 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.