GPR172A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405622

Visão geral

SLC52A2 codifica a proteína humana transportadora de riboflavina GPR172A (RFVT2), um transportador da membrana plasmática que medeia a captação celular de riboflavina (vitamina B2), um precursor dos cofatores flavínicos essenciais FMN e FAD. Ao sustentar reações redox dependentes de flavoproteínas, o metabolismo oxidativo mitocondrial e a defesa antioxidante, a GPR172A dá suporte a vias como a cadeia de transporte de elétrons, a oxidação de ácidos graxos e, de modo mais amplo, à homeostase energética celular. A interrupção do transporte de riboflavina altera as atividades de enzimas dependentes de flavinas e está associada a disfunção neurometabólica. Variações genéticas em SLC52A2 estão relacionadas a síndromes de deficiência do transportador de riboflavina que afetam nervos periféricos e a função do sistema nervoso central, tornando esse gene relevante para estudos de transporte de nutrientes e respostas ao estresse mitocondrial.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GPR172A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SLC52A2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SLC52A2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SLC52A2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GPR172A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SLC52A2 para a investigação da sinalização de GPR172A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SLC52A2 críticos para a função GPR172A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SLC52A2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GPR172A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GPR172A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SLC52A2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GPR172A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GPR172A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SLC52A2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SLC52A2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.