GPR110 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405326-ACT

ADGRF1 codifica o recetor acoplado à proteína G de adesão GPR110, um recetor de membrana multipasse implicado na regulação de interações célula–célula e na integração de sinais extracelulares na membrana plasmática. Como aGPCR, o GPR110 pode acoplar-se a proteínas G heterotriméricas para influenciar a sinalização de segundos mensageiros e os programas a jusante que controlam proliferação, sobrevivência e diferenciação, com efeitos dependentes do contexto entre diferentes tipos de tecido. Alterações na expressão de ADGRF1 foram relatadas em estudos de biologia tumoral e de processos de desenvolvimento, tornando-o um alvo útil para dissecar a plasticidade transcricional e fenotípica impulsionada por GPCR. O mapeamento de redes de sinalização dependentes de ADGRF1 pode informar a investigação mecanística sobre migração celular, estados do tipo estaminal e responsividade ao microambiente.

GPR110 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADGRF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR110 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADGRF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADGRF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR110. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADGRF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR110 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR110 em células tumorais com expressão de ADGRF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.