GPNMB CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430005

概要

Gpnmb は、マクロファージ、樹状細胞、破骨細胞、メラノサイト、ミクログリアに豊富に発現するI型膜貫通型糖タンパク質である glycoprotein non-metastatic melanoma protein B（GPNMB）をコードします。GPNMB は、リソソームおよびエンドソームの輸送、貪食、細胞外マトリックスのリモデリング、細胞接着といった、免疫活性化や組織修復のあり方を規定するプログラムに関与すると考えられています。その発現は炎症性刺激や細胞ストレスによって誘導されることが多く、骨髄系細胞の分極、骨吸収、色素形成の生物学を制御する経路との関連が示唆されています。GPNMB の発現異常は、神経炎症・神経変性のモデル、代謝および線維化を伴うリモデリング、ならびに腫瘍—免疫微小環境の表現型と関連づけられており、マウス系で機序研究を行う上で有用な分子ノードとなります。

GPNMB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGpnmb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Gpnmb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Gpnmbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GPNMBタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GPNMBシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Gpnmb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GPNMBの機能に不可欠なGpnmbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Gpnmbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GPNMB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGPNMB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Gpnmb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GPNMB HDRプラスミド（m）および GPNMB HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGpnmbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGpnmb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。