golgin 245 Plasmide Double Nickase (h): sc-404412-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- golgin 245 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il golgin 245 Double Nickase Plasmid (h) e il golgin 245 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GOLGA4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: golgin 245 Antibody (G-7): sc-514775
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
golgin 245 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404412-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
golgin 245 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404412-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GOLGA4 codifica la golgina 245, una proteina della matrice del Golgi a coiled-coil che contribuisce all’organizzazione del “Golgi ribbon” e al tethering delle vescicole, necessario per un efficiente smistamento del carico lungo la via secretoria. La golgina 245 partecipa a processi di traffico di membrana che coordinano il trasporto retrogrado e anterogrado tra il Golgi e i compartimenti endosomiali, supportando la corretta distribuzione degli enzimi di glicosilazione e il mantenimento dell’architettura del Golgi. L’alterazione delle reti di tethering e di traffico del Golgi è associata a cambiamenti nella polarità cellulare, nella segnalazione da stress e a difetti nella maturazione delle proteine, frequentemente osservati in contesti di cancro e di malattie neurodegenerative. Come marcatore e regolatore della dinamica del Golgi, la golgina 245 è ampiamente utilizzata per studiare l’organizzazione dell’organello, il trasporto vescicolare e le vie legate alla proteostasi nelle cellule umane.
golgin 245 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GOLGA4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GOLGA4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GOLGA4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GOLGA4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.