Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GMF-β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425657
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GMF-β Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico GMF-β, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GMF-β Antibody (SP-61): sc-134347
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GMF-β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-425657 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il fattore di maturazione gliale beta (GMF-β), codificato nel topo dal gene *Gmfb*, è un regolatore citosolico conservato del rimodellamento del citoscheletro di actina, che influenza i cambiamenti della forma cellulare e la motilità in contesti neurali e immunitari. GMF-β interagisce con il complesso Arp2/3 per modulare la dinamica delle ramificazioni dell’actina, collegandosi così a vie che governano la crescita dei neuriti, il rimodellamento sinaptico e le risposte delle cellule gliali ai segnali ambientali. Nel sistema nervoso centrale, GMF-β è stato studiato in relazione alla segnalazione neuroinfiammatoria e ai programmi di attivazione cellulare associati allo stress, nei quali un’alterata regolazione del citoscheletro può influire sull’omeostasi tissutale. Processi associati a GMF-β deregolati sono rilevanti in modelli sperimentali di neurodegenerazione e di danno infiammatorio attraverso effetti sulla migrazione cellulare, sulla gliosi reattiva e sulla segnalazione dipendente dal citoscheletro.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GMF-β (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gmfb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gmfb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gmfb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GMF-β.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gmfb per lo studio della segnalazione di GMF-β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Gmfb critici per la funzione di GMF-β
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gmfb per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal GMF-β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GMF-β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gmfb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal GMF-β Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GMF-β (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gmfb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gmfb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.