Plasmide Double Nickase (h) Glycophorin C: sc-405123-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Glycophorin C correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Glycophorin C Double Nickase (h) et le plasmide Glycophorin C Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GYPC. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Glycophorin C/D Antibody (F-8): sc-365599
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Glycophorin C | sc-405123-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Glycophorin C | sc-405123-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GYPC code la glycophorine C, une sialoglycoprotéine majeure de la membrane des érythrocytes humains, qui contribue à la stabilité membranaire et à la charge de surface grâce à son domaine extracellulaire fortement glycosylé. La glycophorine C s’associe au réseau membrane–cytosquelette, notamment via des interactions liées à la protéine 4.1R, et soutient la déformabilité des globules rouges sous contrainte de cisaillement. Les variations ou le déficit en GYPC peuvent modifier les propriétés mécaniques des érythrocytes et la présentation des antigènes, ce qui en fait un gène pertinent pour l’étude des maladies héréditaires de la membrane érythrocytaire et de la biologie des groupes sanguins. En tant que déterminant de surface érythrocytaire important, la glycophorine C sert aussi de modèle pour étudier le trafic des glycoprotéines, l’organisation membranaire et les interactions hôte–pathogène à l’interface avec l’érythrocyte.
Glycophorin C Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GYPC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GYPC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GYPC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GYPC.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.