Glutathione Peroxidase 7/GPX7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404694-ACT

GPX7 codifica a glutationa peroxidase 7, uma peroxidase de tiol localizada no retículo endoplasmático (RE) que ajuda a controlar os níveis de peróxido de hidrogênio e de hidroperóxidos lipídicos para preservar a homeostase redox. Ao limitar o dano oxidativo a proteínas e apoiar a formação de pontes dissulfeto e a proteostase, a GPX7 se integra à sinalização de estresse do RE, às vias da resposta a proteínas mal dobradas (UPR) e a redes antioxidantes mais amplas. Alterações na atividade da GPX7 têm sido associadas a fenótipos impulsionados por estresse oxidativo que afetam a integridade epitelial, a sinalização inflamatória e contextos de transformação celular. Como reguladora redox, a GPX7 é frequentemente estudada em modelos de adaptação ao estresse, disfunção associada ao metabolismo e biologia tumoral, nos quais as espécies reativas de oxigênio (ROS) moldam a sinalização e a sobrevivência.

Glutathione Peroxidase 7/GPX7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPX7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Glutathione Peroxidase 7/GPX7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPX7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPX7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Glutathione Peroxidase 7/GPX7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPX7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Glutathione Peroxidase 7/GPX7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Glutathione Peroxidase 7/GPX7 em células tumorais com expressão de GPX7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.