Particules Lentivirales d'Activation (h) Glucose Transporter Glut5: sc-401907-LAC

SLC2A5 code pour le transporteur facilitatif d’hexoses GLUT5, un transporteur du fructose à haute affinité, localisé principalement à la membrane plasmique des cellules épithéliales absorbantes ainsi que d’autres tissus à forte activité métabolique. En médiant l’entrée du fructose, GLUT5 soutient l’apport de carbone cellulaire vers la glycolyse et la lipogenèse et s’inscrit dans les voies de détection des nutriments et de reprogrammation métabolique. Une expression altérée de SLC2A5 a été associée à des modifications de la gestion du fructose, des réponses au stress oxydatif et inflammatoire, et à des phénotypes métaboliques spécifiques aux tissus, pertinents pour les troubles du métabolisme des glucides et l’utilisation des nutriments par les cellules tumorales. En tant que transporteur de la famille des solute carriers, GLUT5 sert également de modèle pour étudier la cinétique du transport membranaire, la sélectivité des substrats et la régulation par des signaux alimentaires et hormonaux.

Les particules d'activation lentivirales Glucose Transporter Glut5 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SLC2A5 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Glucose Transporter Glut5 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SLC2A5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Glucose Transporter Glut5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SLC2A5 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.