Glucose Transporter Glut3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423000

Panoramica

Slc2a3 codifica il trasportatore facilitato del glucosio ad alta affinità GLUT3, una delle principali vie per l’assorbimento basale di glucosio nelle cellule murine con elevata richiesta metabolica, inclusi i neuroni e le popolazioni immunitarie attivate. Regolando la disponibilità intracellulare di glucosio, GLUT3 sostiene il flusso glicolitico, la produzione di ATP e le vie biosintetiche che collegano il sensing dei nutrienti alla sopravvivenza e alla proliferazione cellulare. Alterazioni dell’attività di GLUT3 possono spostare l’equilibrio redox e le reti di segnalazione metabolica, come AMPK e mTOR, influenzando le risposte allo stress e i programmi di differenziamento. La disregolazione del trasporto di glucosio viene spesso studiata in ambiti di neurobiologia, infiammazione e fenotipi patologici guidati dal metabolismo, in cui i cambiamenti nell’utilizzo del glucosio contribuiscono alla fisiopatologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Glucose Transporter Glut3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc2a3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc2a3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc2a3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Glucose Transporter Glut3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc2a3 per lo studio della segnalazione di Glucose Transporter Glut3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc2a3 critici per la funzione di Glucose Transporter Glut3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc2a3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Glucose Transporter Glut3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Glucose Transporter Glut3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc2a3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Glucose Transporter Glut3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Glucose Transporter Glut3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc2a3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc2a3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.