Glucose Transporter Glut3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400584-ACT

SLC2A3 codifica il trasportatore di glucosio Glut3 (GLUT3), un trasportatore facilitato del glucosio ad alta affinità che consente un rapido assorbimento di glucosio nelle cellule con elevata richiesta energetica. Regolando la disponibilità intracellulare di glucosio, GLUT3 influenza il flusso glicolitico, la produzione di ATP e le vie di segnalazione metabolica a valle che coordinano proliferazione, differenziamento e risposte allo stress. Un’alterata espressione di SLC2A3 è stata associata alla riprogrammazione metabolica e a programmi di adattamento all’ipossia, ed è spesso studiata in contesti quali infiammazione, neurobiologia e metabolismo associato ai tumori. In quanto trasportatore di membrana plasmatica, GLUT3 fornisce anche un readout funzionale misurabile tramite variazioni nell’assorbimento di glucosio e nella produzione di lattato.

Glucose Transporter Glut3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC2A3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Glucose Transporter Glut3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC2A3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC2A3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Glucose Transporter Glut3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC2A3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Glucose Transporter Glut3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Glucose Transporter Glut3 nelle cellule tumorali con espressione di SLC2A3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.