girdin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402236-ACT

Das humane Gen **CCDC88A** kodiert **Girdin**, ein großes aktinbindendes Scaffold-Protein, das Wachstumsfaktor- und GPCR-Signalwege mit der Umgestaltung des Zytoskeletts verknüpft, um Zellpolarität, gerichtete Migration und Adhäsion zu koordinieren. Girdin wirkt nachgeschaltet von **PI3K–AKT** und interagiert mit heterotrimeren G-Proteinen sowie Polaritätsregulatoren, wodurch es die Bildung von Lamellipodien, den Vesikeltransport und die Dynamik der Rezeptorsignalgebung beeinflusst. Über diese Funktionen trägt **CCDC88A** zu Prozessen wie Neuritenauswuchs und epithelialer Organisation bei; eine veränderte Expression oder Signalkopplung wurde mit aberranten Motilitäts- und Überlebensphänotypen in Verbindung gebracht, wie sie bei Krebs und anderen proliferativen oder neuroentwicklungsbezogenen Krankheitskontexten beobachtet werden. Aufgrund seiner Vernetzung in Signalwegen ist **CCDC88A** ein nützlicher Knotenpunkt, um zu untersuchen, wie die zytoskelettale Architektur die Signaltransduktion und Zellzustandsübergänge moduliert.

girdin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CCDC88A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

girdin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CCDC88A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CCDC88A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen girdin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CCDC88A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von girdin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des girdin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CCDC88A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.