GI24 Plasmide Double Nickase (h): sc-407831-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GI24 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GI24 Double Nickase Plasmid (h) e il GI24 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira VSIR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GI24 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407831-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GI24 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407831-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VSIR (V-set immunoregulatory receptor), noto anche come GI24/VISTA, codifica una molecola di checkpoint immunitario della famiglia B7 che modula l’attivazione delle cellule T e contribuisce a mantenere la tolleranza periferica. GI24 è espresso principalmente nei compartimenti ematopoietico e mieloide, dove influenza la funzione delle cellule presentanti l’antigene e attenua i programmi di citochine infiammatorie. Attraverso la regolazione della segnalazione co-stimolatoria, VSIR contribuisce all’omeostasi immunitaria nei tessuti e all’interno del microambiente tumorale. Un’espressione o una segnalazione di VSIR disregolate sono state associate ad alterazioni dell’immunità antitumorale e a stati infiammatori cronici, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici di immunoregolazione.
GI24 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus VSIR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di VSIR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di VSIR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con VSIR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.