GDF-9B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403596-ACT

BMP15 codifica il fattore di differenziazione della crescita 9B (GDF-9B), un membro della superfamiglia del TGF-β derivato dagli ovociti, che regola la proliferazione e la differenziazione delle cellule della granulosa durante la follicologenesi. GDF-9B segnala attraverso le vie BMP/SMAD, influenzando programmi trascrizionali che coordinano la crescita del follicolo ovarico, la comunicazione tra ovocita e cellule somatiche e il rimodellamento della matrice extracellulare. Un’attività alterata di BMP15 è associata a fenotipi riproduttivi, tra cui una funzione ovarica compromessa e caratteristiche legate all’infertilità, rendendolo rilevante per gli studi sullo sviluppo gonadico e sulla regolazione endocrina. Inoltre, il cross-talk di BMP15/GDF-9B con ligandi e recettori correlati fornisce un modello maneggevole per analizzare la segnalazione dipendente dal contesto della famiglia del TGF-β.

GDF-9B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BMP15 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GDF-9B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BMP15 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BMP15, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GDF-9B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BMP15 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GDF-9B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GDF-9B nelle cellule tumorali con espressione di BMP15 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.