Plasmide Double Nickase (h) GDF-15: sc-401430-NIC

Le facteur de différenciation de croissance 15 (GDF15 ; GDF-15) est une cytokine sécrétée, sensible au stress, appartenant à la superfamille du TGF-β, dont l’expression est augmentée en cas de dysfonctionnement mitochondrial, de signaux inflammatoires et de dommages cellulaires. Il module l’équilibre énergétique systémique et l’adaptation des tissus au stress, et est fréquemment utilisé comme indicateur des réponses intégrées au stress impliquant des voies telles que la signalisation p53, l’inflammation médiée par NF-κB et des programmes transcriptionnels liés aux SMAD. En biologie humaine, une expression altérée de GDF-15 est associée au remodelage cardiométabolique, à l’inflammation chronique et aux interactions tumeur–hôte, reflétant des rôles dans la régulation immunitaire, le métabolisme et la survie cellulaire. La perturbation expérimentale de GDF15 soutient des études mécanistiques de la signalisation du stress, du dialogue entre cytokines et des effets dépendants du contexte sur la prolifération et l’apoptose.

GDF-15 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GDF15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GDF15. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GDF15. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GDF15.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.