GCNF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406967

Panoramica

NR6A1 codifica il germ cell nuclear factor (GCNF), un recettore nucleare orfano che agisce principalmente come repressore trascrizionale durante lo sviluppo embrionale e nella biologia delle cellule germinali. GCNF contribuisce alla specificazione delle linee cellulari e al mantenimento dei programmi di differenziamento legandosi a elementi di risposta nei promotori bersaglio e reclutando complessi corepressori che modificano lo stato della cromatina. Nelle cellule umane, le reti regolate da NR6A1 intersecano i circuiti di pluripotenza e differenziamento, inclusa la repressione di geni come POU5F1/OCT4, collegandolo al controllo epigenetico delle transizioni dello sviluppo. Un’attività di NR6A1 deregolata è stata studiata in contesti che coinvolgono differenziamento aberrante e riprogrammazione trascrizionale, rendendolo rilevante per ricerche su disturbi dello sviluppo e sulla plasticità delle cellule tumorali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GCNF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NR6A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NR6A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NR6A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GCNF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NR6A1 per lo studio della segnalazione di GCNF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NR6A1 critici per la funzione di GCNF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NR6A1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GCNF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GCNF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NR6A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GCNF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GCNF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NR6A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NR6A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.