GBP3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402792

Panoramica

La guanilato-binding protein 3 (GBP3) è una grande GTPasi umana inducibile dagli interferoni che partecipa ai programmi di difesa immunitaria innata a valle della segnalazione dell’interferone di tipo I/II. GBP3 contribuisce alle risposte antimicrobiche e antivirali cellulo-intrinseche coordinando le reti di geni stimolati dagli interferoni e regolando processi di restrizione dei patogeni e processi infiammatori, incluso il crosstalk con vie associate all’inflammasoma. Alterazioni nei pattern di espressione di GBP3 sono state associate a disregolazione immunitaria e a stati infiammatori, e la proteina è spesso studiata nel contesto della biologia delle infezioni e delle interazioni tra tumore e sistema immunitario. In quanto marcatore e mediatore della segnalazione guidata dagli interferoni, GBP3 è rilevante per analizzare le risposte citochiniche, le interazioni ospite–patogeno e i programmi trascrizionali legati all’immunità.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GBP3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GBP3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GBP3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GBP3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GBP3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GBP3 per lo studio della segnalazione di GBP3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GBP3 critici per la funzione di GBP3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GBP3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GBP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GBP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GBP3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GBP3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GBP3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GBP3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GBP3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.