GATA4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-400122-LAC-2

Il gene umano GATA4 codifica un fattore di trascrizione a dito di zinco che si lega ai motivi GATA per regolare programmi genici che controllano lo sviluppo cardiaco, la differenziazione dei cardiomiociti e la formazione di organi derivati dall’endoderma, inclusi fegato e pancreas. GATA4 si integra con cofattori quali TBX5, NKX2-5 e le proteine FOG per modulare l’attività degli enhancer e lo stato della cromatina all’interno di vie che governano la morfogenesi, la specificazione del destino cellulare e la trascrizione cardiaca responsiva allo stress. La perturbazione genetica o una regolazione alterata di GATA4 è associata a difetti cardiaci congeniti ed è stata collegata al rimodellamento cardiaco e ad alcuni tumori selezionati attraverso effetti su reti trascrizionali specifiche di linea cellulare. L’editing genetico o la perturbazione di GATA4 sono ampiamente utilizzati per chiarire la funzione degli enhancer, modellare fenotipi dello sviluppo in linee derivate da iPSC e mappare i circuiti trascrizionali combinando strategie di knockout/knock-in con RNA-seq e profilazione epigenomica.

Le particelle di attivazione lentivirale GATA4 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di GATA4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GATA4 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione GATA4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GATA4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo GATA4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.