GATA4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420496-ACT

O gene murino Gata4 codifica o GATA4, um fator de transcrição do tipo “dedo de zinco” que se liga a motivos GATA para regular programas gênicos que controlam a cardiogênese, a especificação do endoderma e a diferenciação de múltiplas linhagens mesodérmicas e viscerais. Ele se integra a vias centrais do desenvolvimento e a cofatores, incluindo NKX2-5, TBX5, proteínas FOG e a sinalização BMP/TGF-β, para coordenar redes transcricionais que governam o destino celular e a morfogênese tecidual. Em tecidos adultos, o GATA4 contribui para a homeostase cardíaca e para o remodelamento responsivo ao estresse, com efeitos a jusante sobre a expressão de genes sarcoméricos, a função mitocondrial e vias de sobrevivência. A atividade desregulada de GATA4 está associada a defeitos cardíacos congênitos e tem sido implicada em uma reprogramação transcricional mais ampla ligada ao desenvolvimento e a doenças, relevante para pesquisas cardiovasculares e gastrointestinais.

GATA4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gata4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GATA4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gata4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gata4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GATA4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gata4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GATA4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GATA4 em células tumorais com expressão de Gata4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.