GATA3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400134-LAC

GATA3 codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco che si lega al motivo consenso GATA per regolare programmi genici che specificano la linea cellulare, con ruoli di primo piano nella differenziazione dei linfociti T, nello sviluppo epiteliale e nella biologia della ghiandola mammaria. Nelle cellule immunitarie, GATA3 agisce come nodo chiave della polarizzazione Th2 coordinando la trascrizione delle citochine e l’accessibilità della cromatina, integrando segnali tra reti trascrizionali guidate da JAK/STAT e dalle citochine. In contesti epiteliali contribuisce alla differenziazione e al mantenimento dell’identità cellulare, influenzando circuiti trascrizionali che intersecano la segnalazione dei recettori ormonali e le vie di sviluppo. Un’attività o un’espressione deregolata di GATA3 è stata associata a risposte immunitarie alterate e a caratteristiche specifiche di sottotipo nel carcinoma mammario e in altri tumori epiteliali, rendendolo un marcatore ampiamente utilizzato e un bersaglio meccanicistico per lo studio della differenziazione e della regolazione trascrizionale.

Le particelle di attivazione lentivirale GATA3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di GATA3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GATA3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione GATA3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GATA3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo GATA3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.