GAD-67 Plasmide Double Nickase (h): sc-400588-NIC

Il gene umano **GAD1** codifica la glutammato decarbossilasi 67 (**GAD-67**), un enzima citosolico chiave che catalizza la conversione del glutammato in acido γ-amminobutirrico (**GABA**), sostenendo la neurotrasmissione inibitoria nel sistema nervoso centrale. GAD-67 supporta la produzione basale di GABA e influenza l'equilibrio sinaptico, l'eccitabilità neuronale e la plasticità dipendente dall'attività attraverso la regolazione dei pool intracellulari di neurotrasmettitori. Alterazioni nell'espressione o nella regolazione di GAD1/GAD-67 sono state associate a una compromissione dell'omeostasi tra eccitazione e inibizione e sono state studiate nel contesto di disturbi del neurosviluppo e neuropsichiatrici, tra cui schizofrenia, disturbo dello spettro autistico e fenotipi correlati all'epilessia. In quanto marcatore e determinante funzionale dell'identità dei neuroni GABAergici, GAD-67 è comunemente utilizzata per indagare la formazione e la maturazione dei circuiti inibitori, nonché il metabolismo dei neurotrasmettitori in risposta allo stress.

GAD-67 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GAD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GAD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GAD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GAD1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.