Plasmide CRISPR d'Activation (h) GABA_B R2: sc-402517-ACT

GABBR2 code la sous-unité 2 du récepteur GABA\(_B\) (GABA\(_B\) R2), un composant essentiel des récepteurs métabotropes GABA\(_B\) fonctionnels, qui forment des hétérodimères avec GABBR1 pour assurer une neurotransmission inhibitrice lente dans le système nerveux central. Après liaison du ligand, ces récepteurs se couplent aux protéines Gi/o afin d’inhiber l’adénylate cyclase, de réduire la signalisation cAMP/PKA, de moduler les voies MAPK, d’ouvrir les canaux potassiques GIRK et d’inhiber l’activité des canaux calciques voltage-dépendants, contribuant ensemble à façonner l’excitabilité neuronale et la plasticité synaptique. La signalisation GABA\(_B\) influence les oscillations des réseaux, la libération de neurotransmetteurs et le développement neuronal, reliant la régulation du récepteur à de multiples processus neurobiologiques. Une expression ou une fonction altérée de GABBR2 a été associée à des phénotypes neurologiques et neuropsychiatriques, notamment une susceptibilité aux crises et un déséquilibre excitation–inhibition, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques dans des modèles de maladie.

GABAB R2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GABBR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GABAB R2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GABBR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GABBR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GABAB R2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GABBR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GABAB R2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GABAB R2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GABBR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.