GABA_A Rπ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404623

Panoramica

GABRP codifica la subunità π del recettore umano GABA\(_A\), un canale del cloruro regolato da ligando che media la neurotrasmissione inibitoria e modella l’eccitabilità della membrana. L’incorporazione della subunità π può modulare l’assemblaggio del recettore, la conduttanza ionica e le proprietà farmacologiche, influenzando così la segnalazione sinaptica e la conseguente attività delle reti neuronali. La segnalazione del recettore GABA\(_A\) si interfaccia con vie calcio-dipendenti, con lo sviluppo neuronale e con la regolazione omeostatica dell’equilibrio eccitazione–inibizione. Alterazioni dell’espressione o della regolazione di GABRP sono state investigate nel contesto della biologia di malattie neuropsichiatriche e neurologiche, nonché in studi sulla segnalazione nelle cellule epiteliali, dove componenti GABAergiche possono influenzare programmi di proliferazione e differenziamento.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GABAA Rπ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GABRP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GABRP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GABRP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GABAA Rπ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GABRP per lo studio della segnalazione di GABAA Rπ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GABRP critici per la funzione di GABAA Rπ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GABRP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GABAA Rπ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GABAA Rπ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GABRP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GABAA Rπ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GABAA Rπ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GABRP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GABRP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.