GABAA Rδ Plasmide Double Nickase (h): sc-401954-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GABAA Rδ Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GABAA Rδ Double Nickase Plasmid (h) e il GABAA Rδ Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GABRD. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GABAA Rδ Antibody (H-4): sc-271231
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GABAA Rδ Plasmide Double Nickase (h) | sc-401954-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GABAA Rδ Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401954-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GABRD codifica la subunità δ del recettore umano GABA\_A (GABA\_A Rδ), un canale del cloruro inibitorio regolato da ligando che contribuisce in modo rilevante ai recettori extrasinaptici che mediano l’inibizione tonica nei neuroni. Modellando l’eccitabilità di membrana e l’integrazione sinaptica, i recettori GABA\_A contenenti la subunità δ influenzano le oscillazioni di rete e l’equilibrio della neurotrasmissione all’interno delle vie di segnalazione GABAergiche. L’espressione di GABRD e la composizione del recettore sono strettamente regolate durante lo sviluppo e in risposta ai neurosteroidi, collegando questa subunità alla plasticità dipendente dall’attività. Alterazioni della funzione o dell’espressione della subunità δ sono state associate a fenotipi neurologici e neuropsichiatrici, a sostegno della sua rilevanza per studi meccanicistici della segnalazione inibitoria e delle disfunzioni dei circuiti.
GABAA Rδ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GABRD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GABRD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GABRD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GABRD interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.