GABA_A Rα2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402715

Panoramica

GABRA2 codifica la subunità α2 del recettore umano GABA\(_A\), un canale del cloruro pentamerico attivato da ligando che media la rapida neurotrasmissione inibitoria nel sistema nervoso centrale. I recettori contenenti GABA\(_A\) Rα2 modulano l’inibizione sinaptica, l’eccitabilità neuronale e le oscillazioni di rete accoppiando il legame del GABA al flusso di cloruro e all’iperpolarizzazione di membrana. Questa subunità contribuisce all’assemblaggio del recettore, al traffico intracellulare e alla localizzazione sinaptica, integrandosi con processi di segnalazione che regolano l’omeostasi ionica e la plasticità dipendente dall’attività. Alterazioni genetiche e funzionali di GABRA2 sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e legati alle crisi epilettiche, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici della disfunzione dei circuiti inibitori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GABAA Rα2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GABRA2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GABRA2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GABRA2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GABAA Rα2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GABRA2 per lo studio della segnalazione di GABAA Rα2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GABRA2 critici per la funzione di GABAA Rα2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GABRA2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GABAA Rα2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GABAA Rα2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GABRA2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GABAA Rα2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GABAA Rα2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GABRA2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GABRA2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.