Plásmido CRISPR de Activación (h) GABA T-3: sc-403545-ACT

SLC6A11 codifica el transportador humano de GABA 3 (GAT-3), un transportador de membrana dependiente de Na⁺/Cl⁻ que elimina el ácido γ-aminobutírico (GABA) del espacio extracelular y modula la neurotransmisión inhibitoria. Al regular la disponibilidad de GABA sináptica y extrasináptica, GAT-3 influye en la homeostasis del cloruro, la excitabilidad neuronal y las oscilaciones de red, y se acopla funcionalmente al “shunt” del GABA que vincula el reciclaje del neurotransmisor con el metabolismo celular. La actividad de SLC6A11 se integra con las interacciones metabólicas astrocito–neurona y con procesos de transporte que ajustan la recaptación de neurotransmisores y la señalización sináptica. La captación desregulada de GABA y la expresión alterada de SLC6A11 se han investigado en el contexto de fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo en los que se ve perturbado el equilibrio de los circuitos inhibitorios.

GABA T-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC6A11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GABA T-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC6A11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC6A11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GABA T-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC6A11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GABA T-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GABA T-3 en células tumorales con expresión de SLC6A11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.