Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
G2A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401866
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- G2A Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico G2A, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: G2A Antibody (G-5): sc-137112
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
G2A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401866 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
GPR132 codifica il recettore accoppiato a proteine G G2A, un sensore immunoregolatorio implicato nel traffico dei leucociti e nelle risposte a segnali infiammatori. G2A può essere attivato dall’acidificazione extracellulare e da lipidi bioattivi, come derivati ossidati degli acidi grassi, collegando lo stress tissutale alla segnalazione mediata da GPCR tramite proteine G eterotrimeriche e a valle attraverso vie MAPK e dipendenti dal calcio. Nelle cellule immunitarie, la segnalazione di G2A influenza la chemiotassi, lo stato di attivazione e programmi legati alle citochine che modellano i microambienti infiammatori. Un’espressione o una segnalazione deregolata di GPR132 è stata associata a infiammazione cronica e alle interazioni tra tumore e sistema immunitario, rendendolo rilevante per studi meccanicistici in immunologia e biologia del cancro.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO G2A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GPR132 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GPR132 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GPR132 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina G2A.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GPR132 per lo studio della segnalazione di G2A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni GPR132 critici per la funzione di G2A
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GPR132 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal G2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal G2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GPR132. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal G2A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR G2A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GPR132 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GPR132 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.