FucT-l Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420423

Descripción general

Fut1 codifica la α(1,2)fucosiltransferasa 1 (FucT-1), una glicosiltransferasa residente en el aparato de Golgi que transfiere fucosa desde GDP-fucosa a residuos terminales de galactosa, generando glicanos α1,2-fucosilados como los antígenos tipo H en glicoproteínas y glicolípidos. Este paso enzimático es un componente central de la maduración de glicoesfingolípidos y glicoproteínas, y configura los patrones de carbohidratos en la superficie celular que influyen en la unión a lectinas, la organización de la membrana y el reconocimiento intercelular. La fucosilación dependiente de Fut1 se intersecta con vías que controlan la diferenciación epitelial, la función de la barrera mucosa y las interacciones huésped–microbio mediante la modulación de la adhesión y la señalización mediadas por glicanos. Las alteraciones en la α1,2-fucosilación se han asociado con inflamación y desregulación inmunitaria en múltiples contextos, lo que convierte a Fut1 en un nodo útil para estudios mecanísticos de fenotipos dependientes de glicanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FucT-l (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Fut1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Fut1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Fut1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FucT-l.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Fut1 para la investigación de la señalización de FucT-l, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Fut1 críticos para la función de FucT-l
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Fut1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FucT-l CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FucT-l CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Fut1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FucT-l (m) y el plásmido HDR FucT-l (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Fut1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Fut1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.