frizzled-10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406690

Panoramica

FZD10 codifica frizzled-10, un recettore WNT a sette domini transmembrana che regola la trasduzione del segnale attraverso la trascrizione canonica dipendente da β-catenina e vie non canoniche che controllano la polarità planare delle cellule e i flussi di calcio. Modellando le interazioni recettore–ligando sulla superficie cellulare, frizzled-10 influenza la definizione dei pattern di sviluppo, i programmi epitelio–mesenchimali e l’omeostasi tissutale. Un’attività deregolata di FZD10 e un’alterazione della segnalazione WNT/Frizzled sono spesso studiate nel contesto delle reti di segnalazione oncogenica, dell’invasione delle cellule tumorali e di stati di differenziamento aberranti. FZD10 è inoltre utilizzato come nodo di via per analizzare il crosstalk tra i segnali WNT e i programmi trascrizionali responsivi ai fattori di crescita.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO frizzled-10 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FZD10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FZD10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FZD10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina frizzled-10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FZD10 per lo studio della segnalazione di frizzled-10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FZD10 critici per la funzione di frizzled-10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FZD10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal frizzled-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal frizzled-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FZD10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal frizzled-10 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR frizzled-10 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FZD10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FZD10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.