frizzled-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401365-ACT

FZD1 codifica a frizzled-1, um receptor de WNT com sete domínios transmembrana que acopla ligantes WNT extracelulares a cascatas de sinalização intracelular que controlam a especificação do destino celular, a polaridade e a proliferação. Após a ligação do ligante, a frizzled-1 pode ativar programas transcricionais canônicos de β-catenina/TCF e interagir com vias não canônicas de polaridade celular planar e WNT/Ca²⁺, influenciando a dinâmica do citoesqueleto e a migração. A sinalização desregulada de FZD1 tem sido associada à atividade aberrante da rede WNT observada na transformação oncogênica, na fibrose e em distúrbios do desenvolvimento. Como receptor de superfície celular, a frizzled-1 também é útil para estudar a seletividade ligante–receptor, o crosstalk entre vias e o tráfego de receptores em sistemas modelo humanos.

frizzled-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FZD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

frizzled-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FZD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FZD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de frizzled-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FZD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de frizzled-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via frizzled-1 em células tumorais com expressão de FZD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.