FOXL2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403351-ACT

FOXL2 codifica un fattore di trascrizione della famiglia forkhead che svolge un ruolo centrale nello sviluppo ovarico e nell’identità delle cellule della granulosa, regolando programmi di espressione genica specifici di linea. Modula le reti trascrizionali che controllano la steroidogenesi, la follicologenesi e l’equilibrio del ciclo cellulare tramite interazioni con la segnalazione dei recettori nucleari e con regolatori associati alla cromatina. L’attività di FOXL2 contribuisce al mantenimento della funzione ovarica e degli stati di differenziazione cellulare, e la disregolazione del controllo trascrizionale dipendente da FOXL2 è stata collegata a disturbi endocrini riproduttivi e a firme di espressione genica associate ai tumori. In quanto regolatore che si lega al DNA, FOXL2 è spesso studiato per i suoi effetti sull’occupazione di promotori/enhancer, sullo stato epigenetico e sull’output trascrizionale dipendente dal contesto.

FOXL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FOXL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOXL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FOXL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FOXL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOXL2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FOXL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOXL2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOXL2 nelle cellule tumorali con espressione di FOXL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.