FOXJ2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404733-ACT

O FOXJ2 humano codifica um fator de transcrição da família forkhead box que se liga a motivos de DNA específicos de sequência para coordenar programas gênicos envolvidos em decisões de destino celular, diferenciação e respostas transcricionais adaptativas ao estresse. A atividade de FOXJ2 integra-se à regulação da cromatina e a redes de controle transcricional que moldam proliferação, sobrevivência e especificação de linhagem em diversos tipos celulares. A expressão desregulada de FOXJ2 foi relatada em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo estados transcricionais alterados associados à biologia tumoral e regulação gênica do desenvolvimento perturbada. Como regulador nuclear, FOXJ2 constitui um nó tratável para dissecar sinais a montante e vias efetoras a jusante que controlam a transcrição específica de fenótipos.

FOXJ2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXJ2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXJ2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXJ2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXJ2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXJ2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXJ2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXJ2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXJ2 em células tumorais com expressão de FOXJ2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.