Flt-3/Flk-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400218-NIC

FLT3 (Flt-3/Flk-2) codifica una tirosin-chinasi recettoriale di classe III espressa prevalentemente nei progenitori ematopoietici, in cui la dimerizzazione indotta dal ligando innesca l’autofosforilazione e la segnalazione a valle. FLT3 attivato ingaggia le vie PI3K–AKT, RAS–MAPK e JAK–STAT per regolare proliferazione, sopravvivenza e differenziamento durante le fasi precoci dell’ematopoiesi e nello sviluppo delle cellule dendritiche. La deregolazione della segnalazione di FLT3, inclusa l’attivazione aberrante e l’alterata espressione, è fortemente associata alla biologia delle neoplasie mieloidi e ai fenotipi delle cellule staminali/progenitrici leucemiche, rendendolo un nodo ampiamente studiato nelle reti di segnalazione oncogenica. FLT3 funge anche da recettore modello per studiare il traffico degli RTK, il controllo tramite feedback e il cross-talk tra vie di segnalazione in contesti guidati da citochine.

Flt-3/Flk-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FLT3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FLT3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FLT3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FLT3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.