Flotillin-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401200-NIC

FLOT2 codifica per la flotillina-2, una proteina di impalcatura associata alla membrana, arricchita nei lipid raft e in microdomini simili alle caveole, che organizza complessi di segnalazione recettoriale e regola endocitosi, traffico di membrana e dinamica del citoscheletro di actina. La flotillina-2 partecipa a processi quali l’internalizzazione indipendente dalla clatrina, la propagazione dei segnali dai recettori dei fattori di crescita e il controllo spaziale dell’attività delle vie MAPK/ERK e PI3K–AKT. Attraverso il suo ruolo nell’organizzazione dei microdomini della membrana plasmatica e nel trasporto vescicolare, FLOT2 influenza programmi di adesione, migrazione e proliferazione cellulare rilevanti per la biologia tumorale, la segnalazione immunitaria e la neurobiologia. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione della flotillina-2 sono state associate a cambiamenti del comportamento invasivo e della segnalazione di risposta allo stress, a sostegno del suo impiego come nodo meccanicistico negli studi sulla segnalazione oncogenica e sull’organizzazione della membrana.

Flotillin-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FLOT2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FLOT2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FLOT2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FLOT2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.