FLAD1 Plasmide Double Nickase (h): sc-406725-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FLAD1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FLAD1 Double Nickase Plasmid (h) e il FLAD1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FLAD1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FLAD1 Antibody (G-4): sc-376819
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FLAD1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406725-NIC | 20 µg | $410.00 |
FLAD1 codifica la flavina adenina dinucleotide sintetasi 1, un enzima chiave che catalizza la fase finale della biosintesi del FAD a partire dall’FMN, regolando così la disponibilità intracellulare del cofattore flavinico. Il FAD è necessario per l’attività di numerose flavoproteine coinvolte nel metabolismo ossidativo mitocondriale, nella β-ossidazione degli acidi grassi, nel catabolismo degli amminoacidi e nell’omeostasi redox cellulare. Attraverso il suo impatto sulle reazioni di trasferimento di elettroni e sulle risposte allo stress ossidativo, FLAD1 è funzionalmente collegato alle vie del metabolismo energetico e al controllo di qualità dei mitocondri. Alterazioni della funzione di FLAD1 sono state associate a errori congeniti del metabolismo caratterizzati da processi dipendenti da flavoproteine compromessi, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla disfunzione mitocondriale e sullo stress metabolico.
FLAD1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FLAD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FLAD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FLAD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FLAD1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.