FKBP8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403075-ACT

FKBP8 (proteína de ligação ao FK506 8), também conhecida como FKBP38, é uma imunofilina associada às mitocôndrias e ao retículo endoplasmático (RE) que atua como uma isomerase peptidil-prolil cis–trans e como fator de ancoragem (scaffolding), coordenando o dobramento de proteínas e a sinalização. Em células humanas, a FKBP8 modula a apoptose e a homeostase mitocondrial por meio de interações com proteínas da família BCL2 e participa de vias de proteostase, incluindo redes de chaperonas e a degradação seletiva de proteínas. Ela tem sido associada à regulação da sinalização de mTOR e a respostas ao estresse celular que influenciam decisões de sobrevivência sob estresse metabólico ou proteotóxico. A expressão ou a função desregulada de FKBP8 tem sido estudada em contextos que envolvem controle anômalo da apoptose, disfunção mitocondrial e sinalização adaptativa ao estresse alterada, relevantes para a biologia do câncer e para pesquisas em neurodegeneração.

FKBP8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FKBP8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FKBP8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FKBP8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FKBP8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FKBP8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FKBP8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FKBP8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FKBP8 em células tumorais com expressão de FKBP8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.